美国纺织印染师协会标准
AATCC 100-2004抗菌整理织物的评价

1. 目的和范围
1.1 本方法提供了抗菌性能定量评价的操作程序。抗菌整理织物的评价取决于所使用材料抗菌性能。若材料仅有抑菌性能（抑制细菌繁殖），则采用抗菌处理和无抗菌处理的样品相比较的定性方法AATCC147即可。若材料具有或应用杀菌性能，则还须进行定量评价。定量检测可为抗菌整理织物及材料的应用提供更为明确的蓝图。

2. 原则
2.1 首先采用AATCC 147对试验样品和对照样品进行定性的抗菌性能试验。若呈现抗菌性能则可进行定量试验。对试验样和对照样接种试验菌，培养后，加入定量的中和液采用振荡方式将试片中细菌洗脱出。对洗出液进行活菌计数，计算试验样的细菌减少率。

3. 术语
3.1 （抗菌剂的）活性：抗菌剂抗菌性能的量度。
3.2 抗菌剂：指能杀死细菌或影响细菌繁殖、生长以及活性（抑菌剂）的化学物质。

4. 安全措施
注意：本安全措施仅提供相应的信息，是试验辅助环节，并非必备程序。用本方法试验时，用户有责任采用安全、恰当的技术来处理材料。必须向生产商咨询诸如材料的安全性数据和其他推荐之类的特殊细节。必须咨询并遵循OSHA（职业安全和卫生管理局）的标准及规则。
4.1 开展定性试验和定量试验均必须是经过微生物操作培训和有技术经验的人。必须咨询并遵循美国健康和公益产业部的《微生物学和生物医学实验室安全规范》执行。
4.2 警告：试验中的某些微生物能传染给人类并引发疾病。因此试验及相关人员必须采取合理的保护措施，避免伤害。穿防护服和戴防毒面罩来避免细菌的感染。
4.3 养成良好的试验习惯，在实验区内佩戴防护镜。
4.4 小心取用所有的化学药品。
4.5 洗眼的药水和安全性淋浴应就近放置以备紧急使用。
4.6 试验前，对所有有可能受污染的样品和材料进行灭菌。
4.7 暴露在试验所用化学试剂的剂量应控制在或低于政府机构设立的标准（如OSHA规定的暴露极限[PEL]，参考1989年1月1日的1910.1000CFR的29。）此外，推荐采用下列规范作为暴露于气体污染物的一般性指导：美国政府企业卫生专家大会（ACGIH）的阈限值（TLV），包括时间加权平均阈限值（TLV-TWA）和短时间接触阈限值（TLV-STEL），上限值（TLC-C）等。

5．限制
5.1 定性试验是相对快捷、方便测定织物残余抗菌性能的方法，可参考AATCC 147织物抗菌性能评价：平行划线法。

6．试验菌种
6.1 试验细菌
6.1.1 金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 革兰氏阳性菌
6.1.2 肺炎克雷伯氏菌 ATCC 4352 革兰氏阴性菌
6.1.3 也可根据需要或用途选用其他菌种

7．培养基
7.1 适宜的肉汤/琼脂培养基由营养物质、大豆蛋白和脑心浸液（肉汤）组成
营养肉汤：
蛋白胨（细菌蛋白）        5g
牛肉浸膏                            3g
蒸馏水                                1000ml
7.2 加热至沸腾以促进溶解分散，用1mol /L NaOH或更低浓度溶液调节pH=6.8±0.1(若采用脱水培养基成品直接配制，则不需要此步)。
7.3 量取10ml加入到常规细菌培养管（125×17mm），具塞后并在121℃、103kPa（15psi）的压力下灭菌15分钟。
7.4 营养琼脂：加1.5%细菌用琼脂到营养肉汤中，加热至沸腾。用氢氧化钠溶液调节pH=7.1±0.1。取15±1ml放入常规细菌培养管，塞上塞子并在103kPa的压力灭菌15分钟（也可用1000ml硼硅酸盐烧瓶装来灭菌，然后从烧瓶中将其倒入培养皿）。
7.5 浆状接种物（用于疏水性织物）：
氯化钠                    8.5g
琼脂                        3.0g
蒸馏水                    1000ml

8. 试验菌的保藏
8.1 用直径为4mm接种环将菌株转接到营养肉汤中，每天连续转接不超过2周（即14代以内，用3～14代细菌进行实验）。2周后，重新从保藏菌株上进行转接，在37±2℃（或其它适宜温度）下培养。
8.2 在营养琼脂或适宜的琼脂斜面上保藏细菌，在5±1℃下保藏，并1个月转接一次。

9．定性试验（推断性试验）
9.1 用AATCC 147和上文的试验菌株来评价试验样和对照样的抑菌性能。若发现材料有明显的抗菌作用，则验证其杀菌性能，需继续进行下文的定量试验。

10定量试验（确定性试验）
10.1 样片制备 以下描述均指织物样品。对于无纺布，需对本法进行适当修正，再进行试验。
10.1.1 样片的尺寸和形状：将样品裁剪成直径为4.8±0.1cm（1.9±0.03英寸）圆片，将这些样片置于250ml带盖的广口玻璃锥瓶中。样片数量取决于材料种类和织物结构，以刚能吸收1.0±0.1ml菌液为标准。如约4片棉布可吸入1ml，每瓶用的样片数须在报告中注明。
10.1.2 对照样 与试验样片同材质但没有进行抗菌整理。（阴性控制）
10.1.3 样片灭菌 本步骤为可选。灭菌方法取决于织物种类和整理方法。棉布、醋酸纤维和很多人造纤维都可用高压法灭菌，羊毛可用环氧乙烷灭菌或间歇蒸汽灭菌。间歇蒸汽灭菌也是对某些抗菌处理损害较小的方法。如使用了灭菌方法，则须在报告中注明灭菌方式。
10.1.4 每个样品平的接种菌液量：取1.0±0.1ml一定浓度的菌液（把24小时肉汤培养物稀释得到）滴加到每个样品上，以保证每个对照样和抗菌试样0接触时间的回收活菌数为1～2×105cfu，稀释菌液必须采用营养肉汤。
10.2 试验操作
10.2.1 样片的接种 若使用金黄色葡萄球菌，在配制接种液前对24小时培养物充分振荡，静置15～20分钟。将样片分别放于灭菌的培养皿中，然后用微量移液器将稀释后的菌液均匀接种到样片上。将这些样片在无菌状态下转移到广口瓶中，盖紧瓶盖以防蒸发。
10.2.2 接种后（0接触时间）尽快向对照样、抗菌样以及未接种的瓶中加入100±1ml中和液。
10.2.3 中和液应包括中和特定抗菌整理的组分，注意部分织物的PH值要求。记录所用中和液。
10.2.4 充分振荡1分钟，洗脱液用水进行适当的梯度稀释，并将每次稀释后的溶液接种到2份营养琼脂上。稀释倍数通常为100 、101、102。
10.2.5 一定时间的接触培养。将其余未稀释的含有接种对照样和抗菌样的小瓶在37±2℃条件下培养18～24小时。类似的，也可进行其他时间（如1小时、6小时）的培养，来测定这些时间的杀菌效果。
10.2.6 接种培养后样片的计数 培养后，分别在对照样和抗菌样的瓶中加入100±1ml中和液，振荡1分钟，用水进行适当倍数的梯度稀释，并将每次稀释后的溶液接种到2份营养琼脂上。稀释倍数通常为100 、101、102。对抗菌样片，可能需要其他的稀释倍数。
10.2.7 在37±2℃（或其它适宜温度下）对各培养皿进行24～48小时培养。

11．评价
11.1 报告每片样品的细菌数，如经100稀释度培养得到的细菌数为“0”，则记录为“＜100”。
11.2 根据下式计算抗菌样片的细菌减少率。
（1）R（％）＝100（B-A）/B
其中：
R--细菌减少率（%）
A--一定时间培养后的抗菌样的菌落数
B--0接触时间抗菌样的菌落数
（2）R（％）＝100（C-A）/C
其中：
C--0接触时间对照样的菌落数
如B和C相差很大，则取其中大的值。如B,C相差不大，则采用下式进行计算：
（3）R（％）＝100（D-A）/D
其中：D＝(B+C)/2
11.3 如不能得到未处理样品，则利用下式计算，该式考虑了对试验产生干扰作用的各种微生物的作用
Bg（%）=100[]
其中：
E-- 未接种抗菌样的活菌数（存在的背景细菌）
F-- 未接种、预湿处理的抗菌样在培养一段时间后的活菌数（培养后的背景活菌数）
Bg-- 背景微生物
11.4 试验有效的条件：应同时满足（1）和（2）。
（1）未接种试样上的活菌数为0；
（2）接种培养后对照样上的活菌数明显高于0时间细菌数。此点仅适合于用营养肉汤作为稀释液的情况。
11.5 报告抗菌样品对各细菌的减少百分率。
11.6 是否符合标准由相关单位决定
11.7 在报告中注明稀释液的情况

12 精度和偏差
研究（见13.9）表明在实验室内测试用标准培养基计算（SPC）的精确度如下：
（a）不同试验人员之间测试结果允许偏差为18%。
（b）同一试验人员之间测试结果允许偏差为8%。
13 参考文献及注释
13.1 美国健康部和民政局CDCNIHHS 出版社出版物。第84—8395号。（CDC）
13.2 国家局出版手册 AGGIH Kemper Woods中心，1330
Kemper Meadow 辛辛那提 博士 45240 电话：5131742—2020
13.3抗菌蛋白胨由Difco实验室提供，920 圣·亨利博士 底特律 MI48201。
13.4牛肉提取物巴尔的摩生物实验室提供。250先令的接种环 科克艾斯维尔 MD 21030 Difco实验室（地址见上）或美国oxoid有限公司9017 红牌路 哥伦比亚 MD 21045
13.5连续和精确的测试需要纯的、无污染的、非突变体的测试培养基。
为了防止污染使用优良的消毒技术对培养皿和转移物件进行消毒。为了避免物种突变，要严格遵守每月更换。通过定期制作肉块载物片来检测培养基并观测菌落的特征类型情况。
13.6 在和织物的接触期，如果需要稳定态的培养基，就要事先准备测试菌的稀释溶液即0.85%的盐水和适当的缓释处理液。
13.7在稀释溶剂中加入表面活性剂能提高疏水织物纤维的润湿性，但这种表面活性剂会导致细菌的数量减少。通过前面的试验来确定使用的浓度，记录活性剂的作用和浓度。
13.8如果用消毒蒸馏水来代替中性溶液，杀生物剂将有可能被带走。
13.9 Peeler.J.T Leslie J.W. Messer.J.W 复制计算错误分析和细菌菌落计算 J.Food Protection vol.45. 1982 238～240页。